Produção em larga escala da lacase 1 recombinante de Cryptococcus neoformans no sistema de expressão heteróloga Pichia pastoris
Autor(a)
Miranda, Larissa Verginia do Nascimento
Orientador(a) Coorientador(a)
Nicola, Patricia Albuquerque de Andrade
Data de aceite
2026-06-19
Data de disponibilizacao
2026-06-19
Data de publicacao
2026-06-19
Data de defesa submissao
2023-12-07
Citacao
MIRANDA, Larissa Verginia do Nascimento. Produção em larga escala da lacase 1 recombinante de Cryptococcus neoformans no sistema de expressão heteróloga Pichia pastoris. 2023. 67 f., il. Dissertação (Mestrado em Biologia Microbiana) — Universidade de Brasília, Brasília, 2023.
Dissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Microbiana, 2025. Dissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Microbiana, 2023.
Resumo Portugues
A meningoencefalite causada pelo fungo Cryptococcus neoformans em pacientes
imunocomprometidos, principalmente em pacientes com HIV, tem causado aproximadamente 122 mil mortes por ano. Os mecanismos de infecção e sua virulência são objeto de
intensa investigação. A melanização do fungo é um dos fatores que aumenta sua virulência, e é catalisada por uma enzima chamada lacase 1 (Lac1). Além da atividade descrita,
constatou-se que essa enzima pode ser um dos fatores que permite a sobrevivência do
fungo no próprio líquido cefalorraquidiano (LCR), contribuindo para sua permanência no
encéfalo. A levedura, Pichia pastoris, é um bom modelo para produção de proteínas, a
cepa X-33 dessa levedura foi transformada por um plasmídeo contendo a sequência codante de Lac1, com o objetivo de produção de lacase recombinante. A expressão da enzima nos transformantes foi testada por ABTS, otimizada por testes de produção temporal
e foi visto que, em frasco, diferentes tempos de indução não causam diferença significativas na produção da proteína. Além disso, entendeu-se que a Lac1 possui sensibilidade
a alterações de pH, com atividade entre as faixas de 5,1 - 6,1 e que o aumento de escala
para 1,5 litros de cultura leva a uma necessidade de aumento da frequência do fluxo de
alimentação com o indutor metanol.
Resumo Ingles
Meningoencephalitis caused by the fungus Cryptococcus neoformans in immunocompromised patients, especially in those with HIV, has resulted in approximately
122,000 deaths per year. The mechanisms of infection and its virulence are the subject of
intense investigation. Fungal melanization is one of the factors that enhance its virulence
and is catalyzed by an enzyme called laccase 1 (Lac1). Furthermore, beyond the described
activity, it has been observed that this enzyme might be one of the factors enabling the
fungus to survive within the cerebrospinal fluid (CSF), contributing to its persistence in
the brain. The yeast Pichia pastoris serves as a suitable model for protein production. The
X-33 strain of this yeast was genetically transformed with a plasmid containing the coding
sequence of Lac1, aiming to produce recombinant laccase. The expression of the enzyme
in the transformed strains was assessed using ABTS, and optimization was achieved
through temporal production tests. It was noted that, in flask cultures, varying induction
times did not result in significant differences in protein production. Additionally, it was
established that Lac1 exhibits sensitivity to pH changes, with optimal activity within the
pH range of 5.1 - 6.1. Moreover, as the scale of production increased, it was observed that
there was a need for an increased feeding rate with the inducer methanol.
Unidade academica
Instituto de Ciências Biológicas (IB)
Departamento
Departamento de Biologia Celular (IB CEL)
Programa de Pos-Graduacao
Programa de Pós-Graduação em Biologia Microbiana
Idioma
por
Tipo de documento
Dissertação
Formato
application/pdf
Direitos de acesso
Acesso Aberto
Termo de licenca
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