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Análises da micoflora associada ao Baru (Dipteryx alata Vog.) e à caroba (Cybistax antisyphilitica (Mart.) Mart.)
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Título
Análises da micoflora associada ao Baru (Dipteryx alata Vog.) e à caroba (Cybistax antisyphilitica (Mart.) Mart.)
Autor(a)
Santos, Maria de Fatima
Orientador(a) Coorientador(a)
Ribeiro, Wilma Rose Coelho
Data de aceite
2023-01-20
Data de disponibilizacao
2023-01-20
Data de publicacao
2023-01-20
Data de defesa submissao
1996
Citacao
SANTOS, Maria de Fatima. Análises da micoflora associada ao baru (Dipteryx alata Vog.) e à caroba (Cybistax antisyphilitica (Mart.) Mart.). 1996. xi, 118 f., il. Dissertação (Mestrado em Fitopatologia) — Universidade de Brasília, Brasília, 1996.
Descricao nota de grau
Dissertação (mestrado) — Univesidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 1996.
Resumo Portugues
Frutos de baru, cedidos pela EMBRAPA/CPAC, foram coletados em diferentes locais da região do Cerrado e separados por matriz. As sementes aparentemente sadias foram submetidas ao método de incubação em papel filtro e plaqueamento em batata-dextrose-ágar (BDA). As sementes mal formadas e escuras, das diferentes matrizes, foram homogeineizadas em um único lote e submetidas ao método de incubação em papel filtro. Na análise de sanidade das sementes aparentementes sadias, detectou-se os seguintes fungos: Aspergillus niger, Aspergillus flavus, Aspergillus sp., Penicillium sp. Phomopsis sp. Chaetomium sp., Fusarium oxysporum, Fusarium sp., Rhizopus sp., Pestalotia sp. e Trichoderma sp.. Neste trabalho verificou-se que os fungos estudados estão distribuídos em diferentes intensidades entre as regiões e entre as matrizes de uma mesma região. As sementes escuras de baru submetidas ao método de incubação em papel filtro apresentaram 62% de Phomopsissp. Frutos de caroba coletados na região entre Brasília e Anápolis, foram separados em duas categorias: frutos que haviam iniciado a deiscência no campo e frutos fechados que completaram maturação no laboratório. As sementes foram separadas em lotes, sementes não selecionadas, sementes com bordas escuras e sementes claras. As sementes foram avaliadas quanto a incidência fungica, através dos métodos de incubação em papel filtro e BDA. A qualidade fisiológica foi avaliada através dos testes de germinação, em condições de casa de vegetação e laboratório e utilizou-se o teste de tetrazólio para avaliar a viabilidade. Na análise sanitária detectou-se os seguintes fungos: Phomopsis sp., Lasiodiplodia theobromae, A. niger, A. flavus, Aspergillus spp., Fusarium sp . e Penicillium sp. O gênero Phomopsis obteve maior incidência sobre as sementes em relação aos demais fungos. Nos três lotes (sementes não selecionadas, escuras e claras), a maior incidência de Phomopsis sp. foi constatada em sementes com bordas escuras. O poder germinativo das sementes foi influenciado pelo seu grau de escurecimento. Apesar do teste de tetrazólio ter indicado que mais de 72% das sementes escuras estavam viáveis, elas apresentaram a menor porcentagem de germinação e a maior incidência do fungo Phomopsis sp. Na terceira etapa deste trabalho procurou-se testar a patogenicidade de Phomopsis sp. em sementes de baru e de Phomopsis sp. e L. theobromae em sementes de caroba. A porcentagem de emergência de plântulas de baru oriundas de sementes inoculadas com Phomopsis sp. foi menor em relação às sementes não inoculadas, provocando tombamento e impedindo a formação de plântulas. As plântulas de caroba originadas de sementes inoculadas com Phomopsis sp. e L. theobromae não mostraram sintomas de pós emergência, sendo observada apenas a redução da germinação. Quatorze isolados de Phomopsis sp., obtidos de sementes de baru (Dipteryx alata) e caroba (Cybistax antisyphilitica), foram caracterizados utilizando-se a técnica Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD), para os isolados de cultura monospórica e não monospórica. Os isolados também foram caracterizados através de dados de crescimento em diferentes temperaturas (20, 25 e 30°C) e a morfologia (comprimento e largura dos esporos alfa e beta), para isolados de cultura monospórica. Utilizando a técnica RAPD, dos 63 primers testados, 18 foram selecionados para o estudo. Foram estimados os índices de similaridade utilizando os coeficientes de Jaccard e Dice para todos os isolados de cultura monospórica e não monospórica. As matrizes de similaridade obtidas utilizando os dois índices foram altamente correlacionadas quando comparadas pelo teste estatístico de Mantel. O índice entre as matrizes de similaridade geradas para cultura monospórica e não monospórica foi de 0,879. 103 O maior crescimento micelial da colônia de Phomopsis sp. foi a 25 °C e o isolado 2 de caroba obteve o maior crescimento micelial em todas as temperaturas. A maioria dos isolados apresentaram a forma beta, exceto o isolado 11.0 isolado 2, de caroba, apresentou a menor média para largura e comprimento da forma de esporo alfa e a menor média para comprimento do esporo beta. Foram estimados os índices de dissimilaridade para todos os isolados levando em consideração os dados de crescimento micelial, largura e comprimento do conídio utilizando o Coeficiente Manhattan. Sugere-se através das análises das coordenadas principais e de agrupamento, que o isolado 2 de caroba seja um taxon distinto. Este resultado se assemelha ao obtido em RAPDs, onde o isolado 2 possui baixa similaridade com relação aos outros isolados. Verificou-se também que os isolados 10 e 14 são morfologicamente muito semelhantes e o mesmo foi observado para RAPDs. Na avaliação dos dados morfológicos observou-se que o isolado 11, de baru, separou-se dos demais isolados. Isto não foi observado para os dados obtidos através da técnica de RAPDs. Os resultados mostraram que o agrupamento dos isolados não reflete a distribuição dos mesmos de acordo com origem e hospedeira, seja na análise genômica bem como na morfologia. A comparação da matriz gerada pelos dados de RAPD e a matriz de dados morfológicos, usando-se o teste estatístico de Mantel, não mostrou correlação. No viveiro do Departamento de Parques e Jardins (DPJ) do Distrito Federal e em condições de casa de vegetação (EMBRAPA/CENARGEN), foram constatados sintomas de tombamento em plantulas de Dipteryx alata Vog. Em ambiente úmido, sobre as lesões, observouse massas de coloração esbranquiçada, constituídas pela frutificação de um fungo nas plântulas mantidas em viveiro. Dos tecidos infectados isolou-se Cylindrocladium clavatum, que foi inoculado no colo de plântulas sadias, na emissão da terceira e quarta folha. As plantas inoculadas foram mantidas em câmara com umidade saturada à 25°C por 10 dias. Adotou-se quatro tratamentos: plântulas inoculadas e não inoculadas, 24 h após o transplante, e plântulas inoculadas e não inoculadas, sem transplante prévio. Nas plântulas inoculadas com e sem transplante foram verificados 59,4% e 100% de tombamento, respectivamente após o oitavo dia da inoculação. No CENARGEN, em condições de casa de vegetação foram observadas lesões escuras na base do colo e deste tecido isolou-se Fusarium oxysporum. Plântulas sadias foram inoculadas com o fungo, seguindo os mesmos procedimentos utilizados na inoculação com Cylindrocladium clavatum, mas com umidade saturada por apenas 24 horas. Foram inoculadas também sementes aparentemente sadias. Após a inoculação, as sementes foram divididas em dois lotes. Sementes do primeiro lote foram semeadas em solo esterilizado e mantidas em casa de vegetação. O segundo lote de sementes foi colocado para germinar em papel toalha e mantido em germinador. As sementes mantidas em germinador, inoculadas ou não, emitiram a radícula, mas o tamanho da radícula das plântulas inoculadas apresentou uma taxa de crescimento médio inferior a 75 % em relação à testemunha. Em plântulas oriundas de sementes inoculadas e colocadas para germinar em solo observou-se apenas uma pequena redução na altura das plântulas. A deposição do inóculo no colo das plantas não reproduziu sintomas do fungo.
Resumo Ingles
Baru fruits from EMBRAPA/CPAC, were collected from different places in the Cerrado region and separated by matrix. The seeds with healthy aspect were evaluated for seed borne fungi using the following method: blotter test and potato-dextrose-agar medium (PDA). Seeds no healtly and dark from different matrixes, were uniformly mixed in only one sample and evaluated by blotter test. The following pathogens were found in seeds apparently healtly: Aspergillus niger, Aspergillus flavus, Aspergillus sp., Penicillium sp., Phomopsis sp. Chaetomium sp., Fusarium oxysporum, Fusarium sp., Rhizopus sp., Pestalotia sp. and Trichoderma sp.. The present work showed that the fungi studied were distributed in different intensities between regions and between matrixes from the same region. The darkened seeds of baru evaluated by blotter test presented 62% ofPhomopsis sp. recovery. Caroba fruits from the regions between Brasilia and Anápolis were separated in two groups: fruits that start ripping in the field and unriped fruits from field, that are completely ripen later in laboratory. Seeds from these fruits were separated in 3 groups: seeds without selection, seeds with only a darked border and seeds totally clear. The physiologic quality of seeds were evaluated by germination tests in greenhouse and laboratory condition, and viability using the tetrazoliumtest. In the seed health analysis was found the following fungi: Phomopsis sp., Lasiodiplodia theobromae, A. niger, A. flavus, Aspergillus sp., Fusarium sp.. and Penicillium sp. Phomopsis sp. was the highest fungus isolated . In the three groups studied (seeds' without selection, seeds with only a darked border and seeds totally clear), the highest incidence of Phomopsis sp. was obtained in the seeds with a darkened border. The seed germination was influenced by its degree of darkness. Although the tetrazolium test had indicate that more than 72% of darkened seeds were viable, they presented the lowest germination percentage and the highest incidence of Phomopsis sp. Fruits with maturation in the laboratory presented the highest percentage of viable seeds (tetrazolium test) and the highest IVG (velocity germination indice) values. In the third part ofthis work, patogenicity tests were carried out for Phomopsis sp., in baru seeds and Phomopsis sp. and L. theobromae, in caroba seeds. The percentage of emerged seedling of baru, when inoculated with Phomopsis sp. was lower than when in non inoculated seeds, producing damping-off and not alloiwing seedling formation. Seedling of caroba, from inoculated seeds with Phomopsis sp. and L. theobromae, did not showed symptoms after emergence. It was only observed a reduced germination. Random Amplified Polymorphic (RAPD) method was used to distinguish 14 isolates of Phomopsis sp., using monosporic and non monosporic cultures, obtained from baru and caroba seeds. Growth rate at different temperatures (20, 25 and 30°C), and morphology (width and length of alfa and beta spores) in monosporic cultures, were also investigated. Using the RAPD technique, 63 arbitrary were screened for polymorphisms. Eighteen primers were selected and used in this study. Similarity coefficients were obtained for all isolates of monosporic and non monosporic cultures using the Jaccard and Dice coefficients. Similarity indices obtained for both cultures were highly correlated, as tested by matrix correlation (Mantel statistics). The correlation between the matrix similarity for monosporic and non monosporic culture was 0,879. The largest colony mycelial growth was obtained when isolates were grown at 25°C, and isolate 2 had the highest growth among all isolates, in all temperatures tested. Beta spores were detected for most of the isolates tested, with the exception of isolate 11. The lowest width and length average for the alfa conidia was obtained for isolate 2. The lowest length 105 average for beta conidia was also obtained for isolate 2. An Index of dissimilarity for morphological traits was estimated for all isolates using the Manhattan coefficient, taking in to account the information about the mycelial growth and the width and length of alfa and beta conidia. Principal coordenates analysis and UPGMA cluster analysis, suggest that isolate 2, from caroba, may be a distinct taxon, because this isolate was separated from the other isolates. These results are in aggrement with those obtained using RAPDs, where the isolate 2 shows a much lower similarity in relation to all other isolates. It was also verified that isolates 10 and 14 were very similar morphologically and the same was observed using RAPDs. In the morphologic evaluation it was observed that isolate 11, from baru, was separated from the other isolates. This was not observed using the RAPDs technique. The results showed that the clustering of the isolates based on genomic analysis or morphology does not reflect the distribution of these isolates, according to the geographical origin and host,. In several cases, isolates from the same place or host belonged to different clusters. The similarity matrix obtained with RAPD and the dissimilarity matix from morphological information were not correlatied as tested by matrix correlation (Mantel statistics). Seedlings of Dipteryx alata with damping-off symptoms were found under nursery (Departamento de Parques e Jardins - DPJ) and greenhouse conditions at the CENARGEN. It was observed a whitish mass of the fungus in the seedlings kept in the nursery. From the infected tissue it was isolated Cylindrocladium clavatum, which was inoculated in the colon of healthy plants, after the formation ofthe third and fourth leaves, inoculated plants were kept in a humid chamber, at 25 °C for 10 days. Four treatments were performed: Inoculated and non inoculated seedlings 24 hours after the seedling transplant; and inoculated and non inoculated seedlings, without previous seedling transplant. Inoculated seedlings with and without transplanted presented 59,4% and 100% of damping-off, respectively, eight days after the fungus inoculation. In the seedlings kept in greenhouse conditions, at CENARGEN, it was observed a dark lesion at the base of the colon and from this, it was isolated Fusarium oxysporum. Using the same inoculation method cited above, healthy seedlings were inoculated with this fungus, but the seedlings were kept in a humid chamber only for 24 hours. Pathogenicity tests were carried out also for Fusarium oxysporum, using apparently healthy seeds selected by the seed health test. After inoculation, the seeds were separeted in two groups. Seeds from the first group were planted on sterilized soil and kept in greenhouse conditions. Seeds from the second groups were placed in a paper towel and were kept in a humidity chamber condition. These seeds, inoculated or non inoculated with Fusarium oxysporum, formed radicle, but tha radicle size of the of inoculated seedlings presented a growth rate average lower than 75%, in relation to the control plants. It was observed the absence ofradicle emergence and the lowest fresh weight average for the inoculated seedlings, in relation to the non inoculated. In seedlings that were originated from inoculated seeds and that were placed to germinate in soil, it was observd only smale reduction in the plant size.
Unidade academica
Instituto de Ciências Biológicas (IB)
Departamento
Departamento de Fitopatologia (IB FIT)
Programa de Pos-Graduacao
Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia
Idioma
por
Tipo de documento
Tese
Formato
application/pdf
Direitos de acesso
Acesso Restrito
Palavras-chave
Baru||Fungos||Frutos nativos||Cerrado
Identificador OAI
oai:repositorio.unb.br:10482/45566
Data de atualizacao OAI
2025-03-19T16:33:47Z