Papel das etapas precoces de ativação da produção de EROs na indução das NETs
Autor(a)
Damascena, Hylane Luiz
Orientador(a) Coorientador(a)
Fontes, Wagner
Data de aceite
2022-04-01
Data de disponibilizacao
2022-04-01
Data de publicacao
2022-04-01
Data de defesa submissao
2021-12-08
Citacao
DAMASCENA, Hylane Luiz. Papel das etapas precoces de ativação da produção de EROs na indução das NETs. 2021. 121 f., il. Tese (Doutorado em Patologia Molecular) — Universidade de Brasília, Brasília, 2021.
Tese (doutorado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2021.
Resumo Portugues
Neutrófilos são células do sistema imune inato que se destacam por serem as células mais abundantes do sangue periférico. Eles são os primeiros a chegarem no local da infecção e, dentre os mecanismos de defesa, utilizam as armadilhas extracelulares (NETs), que permitem captura e morte extracelular de microrganismos, o que ocorre independente da fagocitose e morte intracelular. Apesar, de ser um mecanismo benéfico para a defesa imune do hospedeiro, as NETs têm sido associadas a diversas doenças, devido à liberação do DNA e proteínas que favorecem a formação de trombos, bem como constituem-se como autoantígenos. Dessa forma, a atuação regulada de NETs é importante para a defesa do hospedeiro, enquanto a resposta acentuada leva a danos. Uma das vias, conhecida como NETose suicida, é dependente de espécies reativas de oxigênio (EROs) e engatilha diversos mecanismos celulares levando à liberação do DNA nuclear. O objetivo do presente trabalho foi elucidar o envolvimento de proteínas e vias de sinalização durante o período inicial da formação de NETs (60 minutos) associadas ao burst respiratório, por meio da análise proteômica de neutrófilos ativados por PMA e inibidos por apocinina. A cinética da produção de EROs mostrou que a inibição da NADPH oxidase posterior ao estímulo possui uma menor influência comparada à inibição antes do estímulo. Essa produção observada nos primeiros 20 minutos foi suficiente para desencadear a formação das NETs e favorecer a morte dos microrganismos devido a um maior aprisionamento observado. Além disso, a produção de EROs nos primeiros minutos é capaz de desencadear alterações no proteoma, associadas a formação das NETs. As proteínas alteradas contribuem com a polimerização da actina (LIMS1, ADAM10 e AMBP) que se associaram com a migração celular. Curiosamente, a migração celular tardia (após 20 min) que não foi associada à formação de NETs, parece não ter a participação da polimerização da actina, mas da tubulina e vitronectina. Além disso, pela primeira vez, este estudo mostrou que neutrófilos podem liberar o componente C4 do sistema complemento, sugerindo o possível envolvimento da ativação do complemento na NETose.
Resumo Ingles
Neutrophils are the most abundant innate immune cell in the peripheral blood. They are the first to arrive at the infection site and among their defense mechanisms, they use extracellular traps (NETs) that promote extracellular capture and death of microorganisms and occur independently of phagocytosis and intracellular death. Despite being a beneficial mechanism for the immune defense of the host, NETs have been associated with several diseases, due to the release of DNA and proteins that favor the formation of thrombi, as well as being recognized as autoantigens. In this way, the regulated performance of NETs is important for the defense of the host, while an intense deregulated response leads to damage. One of the known pathways of NETs is suicidal NETosis. This formation of NETs is dependent on ROS produced by NADPH oxidase, which triggers several cellular mechanisms leading to the release of nuclear DNA. In order to elucidate the involvement of proteins and pathways during the initial period of NETosis (60 minutes) associated to the respiratory burst, we analyzed the proteomic changes of neutrophils induced by PMA and controlled by apocinin, to produce NETs. Kinetic analysis of ROS production showed that the NADPH oxidase inhibition after the PMA stimulus has less influence on ROS generation, compared to inhibition before stimulus. The production of ROS observed in the first 20min was enough to trigger the formation of NETs, favoring microorganisms’ death by entrapment. Furthermore, ROS production in the first minutes is able to initiate proteomic changes associated to NETs formation. Proteins related to actin polymerization (LIMS1, ADAM10 and AMBP) were associated to cellular migration. Curiously, late cellular migration (after 20min.), that was not associated to NETs formation, seems not associated to actin polymerization, however, associated to tubulin and vitronectin. Moreover, this study showed the first time that neutrophils can release the C4 component of the complement system, suggesting the probable activation of complement pathway contributes to NETs extrusion.
Unidade academica
Faculdade de Medicina (FM)
Programa de Pos-Graduacao
Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular
Idioma
por
Tipo de documento
Tese
Formato
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Direitos de acesso
Acesso Aberto
Termo de licenca
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