Resumo Portugues
A infecção pelo vírus da hepatite C (HCV) ocorre com freqüência elevada em
pacientes com insuficiência renal crônica (IRC) em hemodiálise. O objetivo deste
estudo foi caracterizar a variabilidade genética do HCV circulante em pacientes em
hemodiálise no Brasil Central. Na primeira etapa deste estudo, os genótipos e subtipos
do HCV foram identificados em pacientes em hemodiálise no Distrito Federal. Para tal
as regiões 5’ UTR e NS5B do genoma viral foram amplificadas e sequenciadas.
Cinqüenta e uma amostras de soro foram RNA HCV positivas para 5’ UTR e, destas,
42 (82,3%) para NS5B. Pelo seqüenciamento da região 5’ UTR, os genótipos 1 e 3
foram encontrados, sendo o subtipo 1a o mais prevalente (82,3%), seguido dos
subtipos 1b (5,9%), 1a/1b (2,0%) e 3a (9,8%). O subtipo 1a também foi o mais
freqüente (90,5%) para a região NS5B, seguido do subtipo 3a (9,5%). A concordância
da genotipagem para as duas regiões foi de 100% para os genótipos, e de 92,5% para
os subtipos. Na segunda etapa deste trabalho, foi comparada a variabilidade genética
da região hipervariável (HVR1) do HCV em um grupo de pacientes em hemodiálise
anti-HCV negativos, RNA HCV positivos (grupo IRC) e em um grupo de pacientes com
hepatite C crônica anti-HCV e RNA HCV positivos, sem tratamento (controle). Para
isso, 10 amostras de cada grupo foram amplificadas para a região HVR1, clonadas e
seqüenciadas. O grupo controle apresentou uma maior freqüência de sítios variáveis
em HVR1 (83,9% x 59,3%, p<0,05), bem como uma maior diversidade entre as
amostras e entre as quasispecies (intra-paciente), comparadas ao grupo IRC. Além
disso, foi verificada uma maior variabilidade dos aminoácidos nas posições 1(384),
3(386), 8(391), 11(394), 14(397), 15(398), 17(400), 22(405) e 27(410) no grupo
controle, em relação ao grupo IRC, que mostrou maior variabilidade somente na
posição 5(388) (p<0,05). Por outro lado, não houve diferença estatisticamente
significante entre a razão das taxa de substituições não sinônimas e sinônimas dos
grupos IRC e controle, sugerindo uma pressão seletiva similar pelo sistema imune
sobre as populações virais nestes grupos. O perfil hidropático dos aminoácidos de
HVR1 do HCV nos dois grupos analisados revelou-se similar, e as variações nas
cargas foram limitadas a sítios específicos. Concluindo, estes dados mostram uma
menor variabilidade genética na HVR1 do HCV em pacientes em hemodiálise anti-
HCV negativos e RNA positivos (grupo IRC), quando comparados aos indivíduos do
grupo controle, que pode estar associada à imunossupressão. ________________________________________________________________________________________ ABSTRACT
Resumo Ingles
Hepatitis C virus (HCV) infection occurs with high frequency in chronic renal failure
(IRC) patients on hemodialysis. The aim of this study was to characterize the genetic
variability of circulating HCV in hemodialysis patients in Central Brazil. In the first part
of this study, HCV genotypes and subtypes were determined in hemodialysis patients
in the Federal District. For this, 5' UTR and NS5B regions of viral genome were
amplified and sequenced. Fifty-one serum samples were HCV RNA positive for 5 'UTR,
and of these, 42 (82,3%) for NS5B. By the sequencing of the 5’ UTR region, genotype
1 and 3 were found, being subtype 1a the most prevalent (82,3%), followed by
subtypes 1b (5,9%), 1a/1b (2,0%) and 3a (9,8%). The subtype 1a was also the most
frequent (90,5%) for the NS5B region, followed by subtype 3a (9,5%). The
concordance of genotyping for the two regions was of 100% for the genotypes, and of
92,5% for the subtypes. In the second part of this study, the genetic variability within
hypervariable region 1 (HVR1) of the HCV was compared in a group of hemodialysis
patients who were anti-HCV negative and HCV RNA positive (group IRC) and a group
of untreated patients with HCV chronic infection who were anti-HCV and HCV RNA
positive (control). For this, 10 samples from each group were amplified for the HVR1
region, cloned and sequenced. The control group had a higher frequency of variable
sites in HVR1 (83,9% x 59,3%, p<0,05) as well as a greater diversity within (intra -
patient) and among the samples, compared to the IRC group. Moreover, it was
observed a greater variability of amino acids in positions 1 (384), 3 (386), 8 (391), 11
(394), 14 (397), 15 (398), 17 (400), 22 (405) and 27 (410) in the control group, than in
the IRC group, which showed a greater variability only in position 5 (388) (p <0,05). On
the other hand, there was no statistically significant difference between the ratio of the
rates of non-synonymous and synonymous substitutions of the IRC and control groups,
suggesting a similar selective pressure by the immune system on viral populations in
the groups. The hydropathic profile of the amino acids in the HVR1 of HCV in the two
analyzed groups revealed to be similar, and variations in charges were limited to
specific sites. In conclusion, these data show a lower genetic variability within the
hypervariable region 1 (HVR1) of HCV in the hemodialysis patients who were anti-HCV
negative and HCV RNA positive (group IRC), when compared with individuals in the
control group, which may be associated to their immunosuppression.
